IRF-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402135-ACT

O fator regulador de interferon 2 (IRF2) codifica o IRF-2, um fator de transcrição com ligação ao DNA que modula a sinalização de interferon tipo I e programas mais amplos de genes da imunidade inata. O IRF-2 compete com membros relacionados da família IRF em elementos de resposta estimulados por interferon para ajustar a transcrição induzida por citocinas, moldando respostas antivirais, o grau de inflamação e decisões de estado celular. Por meio dessas atividades, o IRF-2 influencia vias que controlam a apresentação de antígenos, a apoptose e redes transcricionais ligadas ao ciclo celular. A expressão ou atividade desregulada de IRF2 tem sido associada a disfunção imunológica e fenótipos transcricionais relevantes para o câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de imunologia e de sinalização oncogênica.

IRF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-2 em células tumorais com expressão de IRF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.