Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
IRE1α Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-429758-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IRE1αO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase IRE1α (m) e o Plasmídeo Double Nickase IRE1α (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Ern1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IRE1α Anticorpo (B-12): sc-390960
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IRE1α Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-429758-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRE1α Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-429758-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene murino **Ern1** codifica a IRE1α, uma quinase/endoribonuclease transmembrana do retículo endoplasmático (RE) que atua como sensor central da resposta a proteínas mal dobradas (UPR). Diante de estresse do RE, a IRE1α oligomeriza e ativa o splicing do mRNA de **Xbp1** para gerar o fator de transcrição **XBP1s**, ao mesmo tempo em que aciona a degradação regulada dependente de IRE1 (RIDD) para remodelar transcritos associados ao RE. Por meio de interação com os ramos PERK e ATF6, a IRE1α coordena a proteostase, a capacidade da via secretora, o metabolismo de lipídios, a autofagia e a sinalização inflamatória. A desregulação da via IRE1α–XBP1 está implicada em estresse metabólico, neurodegeneração, diferenciação de células imunes e adaptação ao microambiente tumoral, tornando **Ern1** um nó-chave para estudos mecanísticos das respostas ao estresse do RE.
IRE1α O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ern1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ern1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ern1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ern1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.