IRE1α Double Nickase Plasmid (h): sc-400576-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRE1α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRE1α Double-Nickase-Plasmid (h) und IRE1α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ERN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IRE1α: sc-390960
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRE1α Double Nickase Plasmid (h) | sc-400576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRE1α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERN1 kodiert für das inositolpflichtige Enzym 1 alpha (IRE1α), eine im ER lokalisierte transmembrane Kinase/Endoribonuklease, die als primärer Sensor fehlgefalteter Proteine und als zentrales Schaltzentrum der Unfolded-Protein-Response (UPR) dient. Bei ER-Stress oligomerisiert IRE1α und aktiviert das RNase-vermittelte Spleißen der XBP1-mRNA sowie den regulierten IRE1-abhängigen Abbau (RIDD). Dadurch werden Transkriptions- und Translationsprogramme umgestaltet, die Proteostase, Sekretionskapazität, Entzündung und Apoptose steuern. Über Crosstalk mit der PERK- und ATF6-Signalgebung sowie die nachgeschaltete Aktivierung der JNK- und NF-κB-Wege beeinflusst ERN1 die angeborene Immunantwort und die metabolische Anpassung. Eine fehlregulierte IRE1α–XBP1-Aktivität ist an Erkrankungen beteiligt, die durch chronischen ER-Stress gekennzeichnet sind, darunter Überlebensprogramme von Krebszellen, Neurodegeneration, Diabetes und entzündliche Erkrankungen, was sie zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien macht.
IRE1α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ERN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ERN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ERN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ERN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.