Plasmide Double Nickase (h) IQGAP1: sc-400597-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IQGAP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IQGAP1 Double Nickase (h) et le plasmide IQGAP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IQGAP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IQGAP1 Antibody (C-9): sc-376021
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IQGAP1 | sc-400597-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IQGAP1 | sc-400597-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IQGAP1 code pour IQGAP1, une protéine d’échafaudage multidomaine qui intègre des signaux provenant des GTPases de la famille Rho, de la calmoduline et de régulateurs du cytosquelette afin de coordonner la dynamique de l’actine, la polarité cellulaire et le trafic membranaire. IQGAP1 relie les complexes d’adhérence et le cytosquelette d’actine à des voies de signalisation, notamment MAPK/ERK et Wnt/β-caténine, influençant ainsi la migration, la prolifération et la cytocinèse. Par ses interactions avec des protéines telles que CDC42, RAC1, la β-caténine, l’E-cadhérine et des composants de l’exocyste, IQGAP1 contribue à organiser une signalisation spatialement restreinte au bord d’attaque et aux jonctions cellule–cellule. Une dérégulation de l’expression ou de la localisation d’IQGAP1 a été associée à une altération de l’intégrité épithéliale, à un comportement invasif et à une signalisation oncogénique dans plusieurs contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des processus liés aux métastases.
IQGAP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IQGAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IQGAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IQGAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IQGAP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.