Plasmide CRISPR/Cas9 KO IPMK (m): sc-427508

Présentation

Le gène murin **Ipmk** code l’inositol polyphosphate multikinase (**IPMK**), une enzyme multifonctionnelle qui phosphoryle les phosphates d’inositol et contribue à la production de polyphosphates d’inositol de plus haut ordre impliqués dans la transduction du signal. IPMK se situe à l’interface du métabolisme des phosphoinositides et des phosphates d’inositol, avec des répercussions sur la signalisation nucléaire, la régulation transcriptionnelle et les voies d’homéostasie énergétique cellulaire telles que les signalisations associées à **PI3K/AKT** et à **mTOR**. Par ces fonctions, IPMK influence des processus comme le contrôle de la croissance, les réponses au stress et la régulation métabolique, et a été étudiée dans des contextes où une dérégulation de la signalisation des phosphates d’inositol est liée à des réseaux de signalisation associés au cancer et à des phénotypes de maladies métaboliques. L’étendue de ses connexions aux voies de signalisation fait d’**Ipmk** une cible utile pour disséquer la manière dont des messagers dérivés de l’inositol coordonnent l’expression génique et les décisions de destin cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IPMK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ipmk dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ipmk, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ipmk à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IPMK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ipmk pour l'étude de la signalisation de IPMK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ipmk essentiels à la fonction de IPMK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ipmk pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IPMK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IPMK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ipmk. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IPMK plasmide HDR (m) et le IPMK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ipmk pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ipmk définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.