Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin αE/ITGAE/CD103: sc-404333-ACT

ITGAE code l’intégrine αE (CD103), qui s’associe à l’intégrine β7 pour former l’hétérodimère αEβ7 se liant à l’E‑cadherine et favorisant l’adhésion ainsi que la rétention des lymphocytes au sein des tissus épithéliaux. Ce récepteur est fortement exprimé par les lymphocytes T mémoire résidents des tissus, certaines sous-populations de lymphocytes T régulateurs et les cellules dendritiques des muqueuses, contribuant à la surveillance immunitaire, à la localisation cellulaire et à la formation de la synapse immunologique. Les interactions dépendantes de CD103 influencent le trafic leucocytaire, l’immunité de la barrière épithéliale et la signalisation inflammatoire dans les microenvironnements muqueux. Des variations d’expression d’ITGAE/CD103 sont fréquemment utilisées pour stratifier les états des cellules immunitaires dans des contextes tels que l’inflammation intestinale, les réponses immunitaires associées à la transplantation et les phénotypes des lymphocytes infiltrant les tumeurs.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGAE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGAE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGAE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αE/ITGAE/CD103. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGAE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αE/ITGAE/CD103 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αE/ITGAE/CD103 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGAE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.