Plasmide Double Nickase (m) Integrin α6/ITGA6/CD49f: sc-421164-NIC

Itga6 code l’intégrine α6 (ITGA6/CD49f), une sous-unité α qui s’hétérodimérise principalement avec β1 ou β4 pour former des récepteurs de la laminine assurant l’ancrage des cellules aux membranes basales. ITGA6 participe à l’organisation des adhérences focales et des hémidesmosomes, reliant l’engagement avec la matrice extracellulaire à la signalisation intracellulaire via les voies FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, qui régulent l’adhésion, la survie et la migration. Dans les tissus murins, l’intégrine α6 est enrichie dans les compartiments épithéliaux et de cellules souches/progénitrices, où elle influence la polarité et les interactions avec la niche au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Une expression ou une signalisation d’ITGA6 dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes d’altération de l’adhésion cellule–matrice, de programmes d’invasion et de remodelage inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour des modèles mécanistiques de maladie.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Itga6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Itga6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Itga6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Itga6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.