Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421175-ACT

Itgb3 codifica a integrina β3 (ITGB3/CD61), uma subunidade β que se associa a αIIb ou αV para formar receptores de integrina que mediam a adesão célula–célula e célula–matriz. Por meio da ligação a ligantes e da sinalização bidirecional, a integrina β3 regula a montagem de adesões focais, a remodelação do citoesqueleto de actina, a migração e vias de sobrevivência, incluindo as sinalizações de FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK. Em sistemas murinos, Itgb3 é amplamente estudado na biologia de plaquetas e megacariócitos, na angiogênese, na função de osteoclastos e no tráfego de células inflamatórias, ligando sua desregulação a fenótipos relacionados à trombose, ao remodelamento vascular e às interações tumor–estroma. Essas funções tornam o ITGB3 um alvo útil para investigar sinalização dependente de adesão e mecanotransdução em modelos relevantes para o desenvolvimento e para doenças.

Integrin β3/ITGB3/CD61 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Itgb3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β3/ITGB3/CD61 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Itgb3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Itgb3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β3/ITGB3/CD61. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Itgb3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β3/ITGB3/CD61 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β3/ITGB3/CD61 em células tumorais com expressão de Itgb3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.