Plasmide Double Nickase (h2) Int-6: sc-405759-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) Int-6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Int-6 Double Nickase (h2) et le plasmide Int-6 Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF3E. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Int-6 Antibody (A-11): sc-133251
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) Int-6 | sc-405759-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain EIF3E (Int-6) code une sous-unité centrale du complexe du facteur d’initiation de la traduction eucaryote 3 (eIF3), qui contribue à coordonner le recrutement de la sous-unité ribosomique 40S et à réguler l’initiation de la traduction, avec des effets en aval sur la protéostasie et la progression du cycle cellulaire ; Int-6 a été associé à un dialogue entre le contrôle traductionnel et les voies de renouvellement des protéines, notamment via des interactions avec le système ubiquitine–protéasome, et est étudié dans des contextes tels que le remodelage de la traduction des ARNm en réponse au stress ; une expression ou une fonction altérée d’EIF3E est liée à une dérégulation des signaux de croissance et a été rapportée dans plusieurs jeux de données liés au cancer, ce qui étaye son intérêt pour l’étude des programmes traductionnels oncogéniques et de la stabilité du génome ; l’édition génomique d’EIF3E permet des études mécanistiques sur l’intégrité du complexe eIF3, la traduction sélective d’ARNm et les dépendances de voies de signalisation dans des modèles de cellules humaines, au moyen d’approches de knockout, de knock-in ou de perturbations spécifiques de domaines.
Int-6 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF3E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF3E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF3E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF3E.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.