Plasmide CRISPR/Cas9 KO Inhibin β-B (m): sc-421131

Présentation

Inhbb code l’inhibine β-B, une sous-unité de la superfamille TGF-β qui forme des homodimères d’activine B ou des hétérodimères d’activine AB avec INHBA, modulant la transcription dépendante de SMAD2/3. La signalisation activine régule le développement gonadique, la folliculogenèse, la fonction des cellules de Sertoli et de granulosa, ainsi que, plus largement, le contrôle de la prolifération cellulaire, de la différenciation et du remodelage de la matrice extracellulaire. Chez la souris, une activité altérée d’Inhbb a été associée à des phénotypes reproductifs et à une dysrégulation endocrinienne, et sa voie s’entrecroise avec des programmes inflammatoires et fibrosants via un contrôle dépendant du contexte de l’expression des cytokines et du remodelage tissulaire. Ces propriétés font d’Inhbb un nœud utile pour étudier l’architecture des voies TGF-β/activine en biologie du développement et dans des états cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Inhibin β-B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Inhbb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Inhbb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Inhbb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Inhibin β-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Inhbb pour l'étude de la signalisation de Inhibin β-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Inhbb essentiels à la fonction de Inhibin β-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Inhbb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Inhibin β-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Inhibin β-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Inhbb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Inhibin β-B plasmide HDR (m) et le Inhibin β-B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Inhbb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Inhbb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.