Plásmido CRISPR de Activación (h) INF2: sc-410096-ACT

El INF2 humano (formin invertida 2) codifica un factor de nucleación de actina que acopla la señalización de GTPasas de la familia Rho con la remodelación dinámica del citoesqueleto de actina y los eventos asociados de tráfico de membranas. INF2 participa en procesos como la organización de fibras de estrés, la regulación de los contactos entre el retículo endoplásmico y las mitocondrias, y la fisión mitocondrial mediante una polimerización de actina coordinada. La actividad alterada de INF2 se ha relacionado con una homeostasis citoesquelética y una polaridad celular desreguladas, y se asocia con fenotipos relevantes para enfermedades en podocitos renales y neuronas periféricas. Como nodo de vía que integra la dinámica de la actina con la función de orgánulos, INF2 se estudia de forma rutinaria en modelos de trastornos del citoesqueleto y de remodelación de la red mitocondrial.

INF2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de INF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

INF2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus INF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional INF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de INF2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo INF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de INF2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía INF2 en células tumorales con expresión de INF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.