Plasmide CRISPR/Cas9 KO ILT-3 (h): sc-407764

Présentation

LILRB4 code le transcrit de type immunoglobuline 3 (ILT-3), un récepteur inhibiteur des leucocytes exprimé principalement par les cellules myéloïdes présentatrices d’antigènes, telles que les cellules dendritiques et les monocytes/macrophages. ILT-3 contribue à l’homéostasie immunitaire en transmettant des signaux inhibiteurs via le recrutement de phosphatases dépendant des motifs ITIM, atténuant ainsi les voies d’activation liées à la présentation de l’antigène, à la costimulation et à la production de cytokines inflammatoires. Par ces mécanismes, ILT-3 participe à l’orientation de la polarisation des lymphocytes T et à l’instauration de programmes associés à la tolérance au sein du dialogue myéloïde–lymphoïde. Une expression dérégulée de LILRB4/ILT-3 a été étudiée dans des contextes d’inflammation chronique, d’échappement immunitaire dans le microenvironnement tumoral et de malignités de la lignée myéloïde, où une signalisation inhibitrice altérée peut moduler la surveillance immunitaire et l’immunité tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ILT-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LILRB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LILRB4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LILRB4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ILT-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LILRB4 pour l'étude de la signalisation de ILT-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LILRB4 essentiels à la fonction de ILT-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LILRB4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ILT-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ILT-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LILRB4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ILT-3 plasmide HDR (h) et le ILT-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LILRB4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LILRB4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.