Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-8RB: sc-401404-ACT

CXCR2 code le récepteur bêta de l’interleukine-8 (IL‑8RB), un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) à sept domaines transmembranaires qui se lie aux chimiokines CXC ELR+ telles que CXCL8/IL‑8 afin d’orienter la chimiotaxie, l’adhésion et l’activation des neutrophiles et d’autres cellules myéloïdes. La liaison au récepteur déclenche une signalisation dépendante de Gαi qui module les flux de calcium intracellulaire et active les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et NF‑κB, influençant l’expression des gènes inflammatoires et le remodelage du cytosquelette. La signalisation de CXCR2 coordonne le trafic leucocytaire, les signaux pro‑angiogéniques et les réponses tissulaires aux lésions, et une activité dérégulée des récepteurs aux chimiokines est impliquée dans l’inflammation chronique et le recrutement de cellules immunitaires associé aux tumeurs. Par conséquent, CXCR2/IL‑8RB est largement étudié dans des modèles de microenvironnements inflammatoires, de biologie des cellules myéloïdes et de migration cellulaire induite par les chimiokines.

IL-8RB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CXCR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-8RB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CXCR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CXCR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-8RB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CXCR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-8RB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-8RB dans les cellules tumorales présentant une expression de CXCR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.