IL-8RB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401404-ACT

CXCR2 codifica o receptor beta da interleucina-8 (IL-8RB), um GPCR de sete domínios transmembrana que se liga a quimiocinas CXC ELR+ como a CXCL8/IL-8 para direcionar a quimiotaxia, a adesão e a ativação de neutrófilos e de outras células mieloides. A ligação ao receptor desencadeia sinalização dependente de Gαi, que modula o fluxo intracelular de cálcio e ativa as vias MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB, moldando a expressão gênica inflamatória e a remodelação do citoesqueleto. A sinalização de CXCR2 coordena o tráfego de leucócitos, sinais angiogênicos e respostas teciduais à lesão, e a atividade desregulada de receptores de quimiocinas está implicada na inflamação crônica e no recrutamento de células imunes associado a tumores. Como resultado, CXCR2/IL-8RB é amplamente estudado em modelos de microambientes inflamatórios, biologia de células mieloides e migração celular impulsionada por quimiocinas.

IL-8RB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CXCR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-8RB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CXCR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CXCR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-8RB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CXCR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-8RB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-8RB em células tumorais com expressão de CXCR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.