Plasmide Double Nickase (m) IL-4Rα: sc-421111-NIC

Il4ra code la chaîne alpha du récepteur murin de l’interleukine‑4 (IL‑4Rα), une sous-unité de récepteur partagée par l’IL‑4 et l’IL‑13 qui intègre les signaux de l’immunité de type 2. Après la liaison du ligand et la formation du complexe récepteur, IL‑4Rα active les voies JAK/STAT, en particulier STAT6, afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la différenciation des lymphocytes, la polarisation des macrophages, les réponses épithéliales et la commutation de classe des immunoglobulines. La signalisation dépendante d’IL‑4Rα façonne l’inflammation allergique, l’hyperréactivité des voies aériennes et le remodelage fibrotique, et elle intervient aussi dans la régulation immunitaire lors de la défense de l’hôte ainsi que dans les phénotypes des cellules myéloïdes associées aux tumeurs. Une activité IL‑4/IL‑13–IL‑4Rα dérégulée a été impliquée dans des modèles expérimentaux d’asthme, de dermatite et d’autres affections inflammatoires à polarisation Th2.

IL-4Rα Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Il4ra dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Il4ra. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Il4ra. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Il4ra.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.