Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-22Rα2: sc-404981-ACT

IL22RA2 code la sous-unité alpha 2 du récepteur de l’IL-22 (IL-22Rα2), un composant de liaison à haute affinité qui module la signalisation de l’IL-22 aux interfaces épithéliales et stromales. En séquestrant l’IL-22 et en modulant sa disponibilité, l’IL-22Rα2 influence des programmes en aval liés à l’intégrité de la barrière, au remodelage tissulaire et à l’expression de gènes inflammatoires, généralement associés à des sorties de signalisation centrées sur STAT3. Une expression altérée d’IL22RA2 a été rapportée dans des contextes d’inflammation des muqueuses et de lésions tissulaires à médiation immunitaire, où une activité dérégulée de l’IL-22 peut affecter la dynamique de réparation épithéliale. Ces caractéristiques font de l’IL-22Rα2 une cible utile pour analyser l’équilibre des réseaux de cytokines dans la peau, l’intestin et les voies aériennes, ainsi que pour étudier la communication croisée entre épithélium et système immunitaire.

IL-22Rα2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL22RA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-22Rα2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL22RA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL22RA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-22Rα2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL22RA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-22Rα2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-22Rα2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL22RA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.