Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-22Rα1: sc-404104-ACT

Le gène humain **IL22RA1** code la sous-unité alpha 1 du récepteur de l’IL-22 (IL-22Rα1), une chaîne de récepteur aux cytokines de type II qui s’associe à **IL10RB** pour former le complexe récepteur fonctionnel de l’IL-22 à la surface des cellules épithéliales et des cellules des barrières tissulaires. La liaison du ligand active la signalisation **JAK/STAT**, avec une phosphorylation marquée de **STAT3**, et interagit avec les voies **MAPK** et **PI3K/AKT** afin de réguler les programmes antimicrobiens, la restitution muqueuse et l’expression de gènes inflammatoires. La signalisation médiée par IL-22Rα1 est liée au maintien de l’intégrité des barrières dans la peau, le poumon et les tissus gastro-intestinaux, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes d’inflammation chronique et de dérégulation épithéliale. Des altérations de l’expression d’**IL22RA1** ou de l’activité de cette voie ont été associées à des troubles inflammatoires et à la biologie tumorale épithéliale, ce qui en fait un point d’entrée utile pour des études mécanistiques des réponses tissulaires induites par les cytokines.

IL-22Rα1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL22RA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-22Rα1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL22RA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL22RA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-22Rα1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL22RA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-22Rα1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-22Rα1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL22RA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.