IL-18R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405214-ACT

IL18R1 kodiert die Alpha-Kette des IL-18-Rezeptors (IL-18R), einen Zelloberflächenrezeptor, der zusammen mit IL18RAP einen Signalübertragungskomplex bildet und so die Reaktionsfähigkeit auf das proinflammatorische Zytokin IL-18 vermittelt. Die Bindung des Liganden fördert eine MyD88-abhängige Signalweiterleitung mit nachgeschalteter Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege und koordiniert Transkriptionsprogramme, die die Th1-Polarisierung, die IFN-γ-Produktion und die Aktivierung der angeborenen Immunantwort prägen. Expression und Signalgebung von IL18R1 sind für entzündliche und autoimmune Mechanismen ebenso relevant wie für die Immunregulation in Infektionen und in Tumormikroumgebungen. Entsprechend wird IL-18R häufig in Zytokinnetzwerken untersucht, die die Aktivierung von Immunzellen, die Chemotaxis und Gewebeentzündung steuern.

IL-18R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL18R1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-18R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL18R1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL18R1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-18R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL18R1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-18R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-18R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL18R1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.