IL-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417060-ACT

A IL10 humana codifica a interleucina-10 (IL-10), uma citocina imunorreguladora pleiotrópica que limita as respostas inflamatórias e promove a homeostase tecidual. A IL-10 sinaliza por meio do complexo do receptor de IL-10 para ativar programas transcricionais de STAT3 dependentes de JAK1/TYK2, suprimindo amplamente a produção de citocinas pró-inflamatórias, a apresentação de antígenos e a ativação da imunidade inata dirigida por NF-κB, ao mesmo tempo em que favorece fenótipos imunes regulatórios. Essa via é central para equilibrar a defesa do hospedeiro e a imunopatologia, e alterações na expressão de IL-10 estão associadas à inflamação crônica, autoimunidade, desfechos de doenças infecciosas e imunossupressão associada a tumores. A IL-10 é comumente estudada em macrófagos, células dendríticas, células T e compartimentos epiteliais para investigar o crosstalk entre citocinas, mecanismos de tolerância e a resolução da inflamação.

IL-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-10 em células tumorais com expressão de IL10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.