IL-10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417060-ACT

Humanes IL10 codiert Interleukin‑10 (IL‑10), ein pleiotropes immunregulatorisches Zytokin, das Entzündungsreaktionen begrenzt und die Gewebehomöostase fördert. IL‑10 signalisiert über den IL‑10‑Rezeptorkomplex und aktiviert JAK1/TYK2‑abhängige STAT3‑Transkriptionsprogramme; dadurch wird die Produktion proinflammatorischer Zytokine, die Antigenpräsentation und die NF‑κB‑getriebene Aktivierung der angeborenen Immunantwort breit unterdrückt, während regulatorische Immunphänotypen unterstützt werden. Dieser Signalweg ist zentral für das Gleichgewicht zwischen Wirtsabwehr und Immunpathologie; eine veränderte IL‑10‑Expression wird mit chronischer Entzündung, Autoimmunität, Verläufen von Infektionskrankheiten und tumorassoziierter Immunsuppression in Verbindung gebracht. IL‑10 wird häufig in Makrophagen, dendritischen Zellen, T‑Zellen und epithelialen Kompartimenten untersucht, um Zytokin‑Crosstalk, Toleranzmechanismen und die Auflösung von Entzündungen zu analysieren.

IL-10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.