IK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402139-ACT

O KCNN4 humano codifica o IK1 (KCa3.1), um canal de potássio de condutância intermediária ativado por Ca2+, que acopla sinais intracelulares de Ca2+ à hiperpolarização da membrana e à entrada sustentada de Ca2+. A atividade do IK1 influencia a regulação do volume celular, o transporte de cloreto e programas de transcrição dependentes de Ca2+, sustentando processos como ativação, proliferação e migração de células imunes. Por meio de efeitos sobre o potencial de membrana e a dinâmica de Ca2+, o KCNN4 integra-se a redes de sinalização que moldam respostas inflamatórias e interações estroma–sistema imune, tornando-se relevante para o estudo de mecanismos implicados em autoimunidade, fibrose e biologia do microambiente tumoral.

IK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNN4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNN4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNN4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNN4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IK1 em células tumorais com expressão de KCNN4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.