Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGSF6: sc-411445-ACT

IGSF6 (membre 6 de la superfamille des immunoglobulines) est une protéine transmembranaire de type immunoglobuline, particulièrement enrichie dans les cellules de la lignée myéloïde, où elle contribue à la régulation de la signalisation immunitaire innée et des états d’activation cellulaires. Elle a été associée aux processus inflammatoires via ses effets sur les réponses des macrophages et des monocytes, et est étudiée dans le contexte des voies dépendantes des cytokines et de la défense de l’hôte. Une expression altérée d’IGSF6 a été rapportée dans des troubles à médiation immunitaire, étayant son utilisation comme marqueur et comme nœud mécanistique au sein de programmes transcriptionnels associés à l’inflammation. Les recherches examinent couramment IGSF6 dans des voies régissant l’activation des leucocytes, la prise en charge des antigènes et le remodelage inflammatoire des tissus.

IGSF6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGSF6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGSF6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGSF6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGSF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGSF6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGSF6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGSF6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGSF6 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGSF6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.