Plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP4 (m): sc-421065

Présentation

Igfbp4 code la protéine de liaison aux facteurs de croissance de type insulinique 4 (IGFBP4), un régulateur sécrété de la biodisponibilité des IGF qui module les interactions d’IGF1/IGF2 avec les récepteurs des IGF et influence ainsi les voies de signalisation PI3K–AKT et MAPK en aval. Dans les tissus murins, IGFBP4 contribue à façonner la prolifération, la survie et la différenciation cellulaires, ainsi que la signalisation du microenvironnement extracellulaire, en contrôlant l’activité locale des IGF. Des altérations de l’expression d’IGFBP4 ont été associées à des programmes de remodelage et d’inflammation dans les compartiments vasculaires et stromaux, ainsi qu’à des changements de phénotypes induits par des facteurs de croissance, pertinents pour la régulation métabolique et les microenvironnements associés aux tumeurs. En tant que modulateur contextuel de la signalisation mitogène, Igfbp4 est fréquemment étudié dans des travaux sur le développement, l’homéostasie tissulaire et les mécanismes pathologiques impliquant une signalisation des facteurs de croissance dérégulée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Igfbp4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Igfbp4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Igfbp4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IGFBP4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Igfbp4 pour l'étude de la signalisation de IGFBP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Igfbp4 essentiels à la fonction de IGFBP4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Igfbp4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IGFBP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IGFBP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Igfbp4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IGFBP4 plasmide HDR (m) et le IGFBP4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Igfbp4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Igfbp4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.