Plásmido CRISPR de Activación (h) IGFBP1: sc-400915-ACT

La proteína 1 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina (IGFBP1) es un regulador secretado de la biodisponibilidad de los IGF que modula la señalización de IGF1/IGF2 al unirse a los ligandos e influir en su interacción con los receptores de IGF. Contribuye a la homeostasis endocrina y metabólica, integrando señales del estado nutricional, la señalización de la insulina y programas transcripcionales hepáticos para moldear la actividad posterior de las vías PI3K–AKT y MAPK. IGFBP1 también afecta las decisiones de crecimiento y supervivencia celular de manera dependiente de IGF y puede interactuar con componentes de la matriz extracelular para influir en la remodelación tisular. La alteración de la expresión de IGFBP1 se ha vinculado con desregulación metabólica y se evalúa con frecuencia en estudios de fisiología hepática, inflamación y contextos de señalización asociados al cáncer.

IGFBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGFBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGFBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGFBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGFBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGFBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGFBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGFBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGFBP1 en células tumorales con expresión de IGFBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.