Plasmide Double Nickase (h) IGF2R/M6PR: sc-401697-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IGF2R/M6PR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IGF2R/M6PR Double Nickase (h) et le plasmide IGF2R/M6PR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IGF2R. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IGF2R/M6PR Antibody (2G11): sc-53146
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IGF2R/M6PR | sc-401697-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IGF2R/M6PR | sc-401697-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IGF2R (également appelé IGF2R/M6PR) code le récepteur du mannose-6-phosphate indépendant des cations, une protéine de trafic multifonctionnelle qui se lie aux hydrolases lysosomales marquées par le M6P et médie leur tri du réseau trans-Golgi et des endosomes vers les lysosomes. Il agit aussi comme récepteur « scavenger » de l’IGF2 extracellulaire, modulant la disponibilité de ce facteur de croissance et influençant des programmes de signalisation liés à la prolifération et à la différenciation cellulaires. Par son rôle central dans le transport endosomal–lysosomal, IGF2R affecte la fonction autophagie–lysosome, le renouvellement des récepteurs et la protéostasie. Une dérégulation d’IGF2R a été associée à des altérations de l’homéostasie lysosomale et à des déséquilibres de la signalisation des facteurs de croissance, pertinents pour les phénotypes du développement et la recherche en biologie des cancers.
IGF2R/M6PR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IGF2R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IGF2R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IGF2R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IGF2R.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.