Plasmide CRISPR d'Activation (m) IGF-1 Receptor α/β/IGF1R: sc-421057-ACT

Igf1r code le récepteur du facteur de croissance analogue à l’insuline 1 (IGF-1R), une tyrosine kinase membranaire qui fonctionne sous forme d’hétérotétramère α/β pour transduire à la surface cellulaire les signaux d’IGF-1 et d’IGF-2. Après liaison du ligand et autophosphorylation, IGF-1R active les cascades PI3K–AKT–mTOR et RAS–RAF–MEK–ERK, intégrant des signaux qui régulent la prolifération, la survie, le métabolisme et la différenciation. Dans des modèles murins, la signalisation d’Igf1r est essentielle à la croissance embryonnaire et postnatale, à l’homéostasie tissulaire et aux réponses au stress, et sa dérégulation est associée à des anomalies du contrôle de la croissance et à des programmes de signalisation oncogéniques. IGF-1R présente également des interactions (« crosstalk ») avec les voies du récepteur de l’insuline et influence des boucles de rétrocontrôle qui modulent le trafic du récepteur, la résistance à l’apoptose et l’énergétique cellulaire.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Igf1r sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Igf1r dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Igf1r, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGF-1 Receptor α/β/IGF1R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Igf1r natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGF-1 Receptor α/β/IGF1R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGF-1 Receptor α/β/IGF1R dans les cellules tumorales présentant une expression de Igf1r silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.