Plasmide Double Nickase (h) IFN-γRα: sc-401191-NIC

IFNGR1 code pour la chaîne alpha du récepteur de l’interféron gamma (IFN-γRα), la sous-unité de liaison au ligand du complexe récepteur de l’IFN-γ, qui initie des voies de signalisation antimicrobiennes et immunomodulatrices en réponse à l’IFN-γ. Lors de l’engagement du récepteur, les kinases JAK1/JAK2 associées phosphorylent STAT1, déclenchant des programmes transcriptionnels qui contrôlent la présentation de l’antigène, l’activation des macrophages et la régulation des réponses immunitaires de type Th1. Cet axe s’entrecroise avec la détection immunitaire innée et les réseaux inflammatoires, modulant l’expression des gènes stimulés par l’interféron et de régulateurs de rétrocontrôle tels que les protéines SOCS. Une dérégulation ou une perte de fonction d’IFNGR1 est associée à une diminution de la réponse à l’IFN-γ et à des phénotypes de défense de l’hôte altérés, ce qui en fait une cible majeure pour l’étude des défauts de signalisation immunitaire et des mécanismes des maladies inflammatoires dans les cellules humaines.

IFN-γRα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFNGR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFNGR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFNGR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFNGR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.