IFN-α/βRβ Double Nickase Plasmid (h): sc-403854-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IFN-α/βRβ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IFN-α/βRβ Double-Nickase-Plasmid (h) und IFN-α/βRβ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IFNAR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IFN-α/βRβ: sc-376273
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IFN-α/βRβ Double Nickase Plasmid (h) | sc-403854-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFN-α/βRβ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403854-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IFNAR2 kodiert die Beta-Untereinheit des Interferon-α/β-Rezeptors, eine entscheidende Komponente des Typ-I-Interferonrezeptorkomplexes, die mit IFNAR1 zusammenwirkt, um IFN-α/β zu erkennen und antivirale sowie immunmodulatorische Signalwege zu initiieren. Die Ligandenbindung aktiviert JAK1 und TYK2, was zur Phosphorylierung von STAT1/STAT2 und zur Bildung des ISGF3-Komplexes führt, der die Expression interferon-stimulierter Gene antreibt; dabei bestehen Wechselwirkungen mit den MAPK- und PI3K-Signalwegen. Über diese Kaskaden trägt IFNAR2 dazu bei, die angeborene Immunerkennung, die Antigenpräsentation, die Zellzykluskontrolle und die Apoptose in unterschiedlichen Zelltypen zu regulieren. Eine Fehlregulation der IFNAR2-Signalübertragung wird mit veränderten antiviralen Antworten, chronischer Entzündung und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, weshalb IFNAR2 häufig im Fokus von Studien zur Interferonbiologie und zu Wirt–Pathogen-Interaktionen steht.
IFN-α/βRβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IFNAR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IFNAR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IFNAR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IFNAR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.