Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α/βRβ (m): sc-421048

Présentation

Ifnar2 code la sous-unité murine du récepteur de l’interféron α/β, IFN-α/βRβ (IFNAR2), un composant central du complexe récepteur des interférons de type I qui relie la liaison extracellulaire d’IFN-α/β à la signalisation intracellulaire JAK–STAT. Après engagement du récepteur, IFNAR2 coopère avec IFNAR1 pour activer TYK2 et JAK1, entraînant la phosphorylation de STAT1/STAT2 et la formation d’ISGF3 afin d’induire l’expression de gènes stimulés par l’interféron, qui régulent la défense antivirale, la présentation de l’antigène et la programmation des cellules immunitaires innées. Cette voie module les niveaux de base de l’inflammation et les interactions avec les voies NF-κB et MAPK, influençant les réseaux de cytokines et l’homéostasie immunitaire. Une signalisation dépendante d’IFNAR2 dérégulée a été impliquée dans des pathologies à médiation immunitaire et dans une susceptibilité modifiée aux infections et à l’inflammation, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en immunologie et en biologie hôte–pathogène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α/βRβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifnar2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifnar2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifnar2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFN-α/βRβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifnar2 pour l'étude de la signalisation de IFN-α/βRβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifnar2 essentiels à la fonction de IFN-α/βRβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifnar2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFN-α/βRβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFN-α/βRβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifnar2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFN-α/βRβ plasmide HDR (m) et le IFN-α/βRβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifnar2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifnar2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.