Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFN-α/βRβ: sc-403854-ACT

IFNAR2 code la sous-unité 2 du récepteur des interférons alpha/bêta (IFN-α/βRβ), un composant essentiel du complexe récepteur des interférons de type I qui médie les réponses cellulaires à l’IFN-α et à l’IFN-β. La liaison du ligand active une signalisation dépendante de JAK1/TYK2 ainsi que des programmes transcriptionnels en aval STAT1/STAT2-IRF9 (ISGF3), coordonnant la défense antivirale, la présentation de l’antigène et la régulation de l’immunité innée. Les voies dépendantes d’IFNAR2 modulent les interactions avec les voies NF-κB et MAPK et influencent les réseaux de cytokines qui façonnent l’activation des cellules immunitaires et l’inflammation tissulaire. Des modifications de l’expression d’IFNAR2 ou de sa capacité de signalisation sont fréquemment étudiées dans des contextes d’expression dérégulée des gènes stimulés par les interférons, de pathologies à médiation immunitaire et d’interactions immunitaires tumorales.

IFN-α/βRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFNAR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFN-α/βRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFNAR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFNAR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFN-α/βRβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFNAR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFN-α/βRβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFN-α/βRβ dans les cellules tumorales présentant une expression de IFNAR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.