Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-αB (m): sc-421046

Présentation

Le gène murin **Ifnab** code l’interféron‑αB (IFN‑αB), un interféron de type I qui amplifie les défenses antivirales innées et façonne les réponses immunitaires adaptatives ultérieures. À la suite de la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) via des voies telles que cGAS–STING, RIG‑I/MDA5–MAVS et les TLR endosomaux, l’IFN‑αB se lie à IFNAR, active la signalisation JAK–STAT et induit la transcription de gènes stimulés par l’interféron (ISG) qui modulent la présentation de l’antigène, l’apoptose et les réseaux de cytokines inflammatoires. Une activité dérégulée des interférons de type I est impliquée dans l’inflammation chronique et l’auto‑immunité, et des signatures d’interféron altérées sont fréquemment analysées dans des modèles d’infection virale et de pathologies à médiation immunitaire. La fonction d’**Ifnab** est donc pertinente pour l’étude des interactions hôte–pathogène, de la programmation des cellules myéloïdes et lymphoïdes, et des réponses tissulaires induites par l’interféron.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-αB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifnab dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifnab, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifnab à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFN-αB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifnab pour l'étude de la signalisation de IFN-αB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifnab essentiels à la fonction de IFN-αB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifnab pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFN-αB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFN-αB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifnab. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFN-αB plasmide HDR (m) et le IFN-αB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifnab pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifnab définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.