IFN-α4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421041

Übersicht

Ifna4 kodiert Interferon‑α4 (IFN‑α4), ein Typ‑I‑Interferon, das als Antwort auf virale Nukleinsäuren und andere Trigger der angeborenen Immunität gebildet wird. IFN‑α4 bindet an den IFNAR‑Rezeptorkomplex und aktiviert darüber eine JAK1/TYK2‑abhängige Phosphorylierung von STAT1/STAT2 sowie die Bildung des Transkriptionskomplexes ISGF3. Dadurch werden interferon‑stimulierte Gene induziert, die die Replikation von Pathogenen einschränken und die Antigenpräsentation modulieren. Diese Signalgebung prägt zudem das Zusammenspiel mit NF‑κB‑ und IRF‑Signalwegen und beeinflusst inflammatorische Genprogramme, die Aktivierung myeloider Zellen sowie das Priming der adaptiven Immunantwort. Eine fehlregulierte Typ‑I‑Interferon‑Aktivität ist relevant für die Forschung zu chronischer Entzündung und Autoimmunität sowie für Wirt‑Pathogen‑Interaktionsmodelle, in denen der Interferon‑Grundton die Krankheitsanfälligkeit und Gewebepathologie beeinflusst.

Das IFN-α4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ifna4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ifna4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ifna4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFN-α4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ifna4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFN-α4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ifna4-Exone abzielen, die für die IFN-α4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ifna4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFN-α4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IFN-α4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ifna4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFN-α4 HDR-Plasmid (m) und IFN-α4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ifna4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ifna4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.