Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFI-204 (m): sc-421033

Présentation

Le gène murin Ifi204 code IFI-204, un membre inductible par les interférons de la famille de protéines PYHIN, impliqué dans la surveillance immunitaire innée et la régulation de l’expression des gènes inflammatoires. IFI-204 est associée à des programmes de détection des acides nucléiques, nucléaires et cytosoliques, qui convergent vers la signalisation des interférons de type I, des réponses transcriptionnelles liées à NF-κB et des points de contrôle du cycle cellulaire. Par l’intermédiaire de ces voies, Ifi204 a été étudié dans des contextes de restriction antivirale, d’activation des macrophages et des cellules dendritiques, et de modulation des états prolifératifs versus sénescents. Une activité dysrégulée d’IFI-204 est donc pertinente dans des modèles expérimentaux d’inflammation chronique, de phénotypes de type auto-immun, de pathologies induites par l’infection et d’interactions tumeur–système immunitaire, sans présumer d’une issue clinique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFI-204 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifi204 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifi204, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifi204 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFI-204.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifi204 pour l'étude de la signalisation de IFI-204, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifi204 essentiels à la fonction de IFI-204
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifi204 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFI-204 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFI-204 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifi204. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFI-204 plasmide HDR (m) et le IFI-204 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifi204 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifi204 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.