Plásmido CRISPR de Activación (h) IFI-16: sc-416568-ACT

La IFI16 humana (IFI-16) es un sensor nuclear de ADN e inducible por interferón que ayuda a coordinar la vigilancia inmunitaria innata de ácidos nucleicos anómalos o extraños. IFI-16 participa en la señalización de interferón dependiente de STING y en respuestas asociadas al inflamasoma, influyendo en programas transcripcionales vinculados a la defensa antiviral, el control del ciclo celular y la regulación asociada a la cromatina. A través de interacciones con la maquinaria de daño del ADN y de transcripción, IFI-16 puede modular las respuestas celulares al estrés y las vías asociadas a la senescencia. La actividad desregulada de IFI16 se ha asociado con señalización inflamatoria, fenotipos de restricción viral y mecanismos de enfermedad relacionados con el sistema inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la detección de ácidos nucleicos y el crosstalk entre vías de interferón.

IFI-16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFI16 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFI-16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFI16 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFI16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFI-16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFI16 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFI-16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFI-16 en células tumorales con expresión de IFI16 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.