IDS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404268-ACT

O IDS humano codifica a iduronato-2-sulfatase, uma sulfatase lisossomal que catalisa a degradação passo a passo dos glicosaminoglicanos heparan sulfato e dermatan sulfato. Ao sustentar o fluxo catabólico lisossomal, o IDS contribui para as vias de depuração celular, a homeostase endolisossomal e a renovação de componentes sulfatados da matriz extracelular internalizados por endocitose. A atividade reduzida do IDS compromete o processamento de glicosaminoglicanos e está associada à mucopolissacaridose tipo II (síndrome de Hunter), ligando a função do IDS a consequências mais amplas do armazenamento lisossomal sobre inflamação, proteostase e sinalização celular.

IDS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IDS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IDS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IDS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IDS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IDS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IDS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IDS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IDS em células tumorais com expressão de IDS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.