IDH1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401159-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IDH1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IDH1 Double-Nickase-Plasmid (h) und IDH1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IDH1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IDH1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDH1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Isocitrat-Dehydrogenase 1 (IDH1) ist ein zytosolisches/peroxisomales, NADP⁺-abhängiges Enzym, das die oxidative Decarboxylierung von Isocitrat zu α-Ketoglutarat katalysiert und dabei NADPH erzeugt, um die Redoxhomöostase und den biosynthetischen Stoffwechsel zu unterstützen. Durch die Kontrolle der Verfügbarkeit von α-Ketoglutarat beeinflusst IDH1 die Lipidsynthese, die zelluläre antioxidative Kapazität und die Aktivität α-Ketoglutarat-abhängiger Dioxygenasen, die an der epigenetischen Regulation beteiligt sind. Eine veränderte IDH1-Funktion ist mit metabolischer Umprogrammierung und gestörten Chromatinzuständen verknüpft, einschließlich gut charakterisierter neomorpher Varianten, die 2‑Hydroxyglutarat produzieren und die DNA-/Histon-Demethylierung beeinträchtigen. Diese Eigenschaften machen IDH1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung der metabolisch-epigenetischen Kopplung, von Reaktionen auf oxidativen Stress und kontextspezifischen Verwundbarkeiten in humanen Zellen.
IDH1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IDH1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IDH1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IDH1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IDH1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.