Particules Lentivirales d'Activation (h) ICK: sc-406371-LAC

L’intestinal cell kinase (ICK) est une kinase protéique sérine/thréonine de la famille CMGC qui intègre des signaux contrôlant la progression du cycle cellulaire, la biologie du cil primaire et la dynamique du cytosquelette. ICK se localise au cil et au corps basal, où elle régule le transport intraflagellaire et la longueur ciliaire, ce qui l’associe à la signalisation développementale dépendante de Hedgehog et au contrôle de la prolifération. Une activité d’ICK altérée a été liée à des phénotypes associés aux ciliopathies et à des troubles du développement, et la dérégulation des réseaux de signalisation des kinases impliquant ICK a été étudiée dans des contextes de croissance et de différenciation aberrantes. En conséquence, ICK constitue une cible utile pour disséquer des voies dépendantes des kinases qui couplent la ciliogenèse à des programmes transcriptionnels et à des transitions d’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales ICK (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ICK dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ICK (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ICK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ICK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ICK ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.