Plasmide CRISPR d'Activation (m) I1PP2A: sc-419111-ACT

La protéine murine Anp32a code I1PP2A, une phosphoprotéine nucléaire acide riche en leucines qui agit comme inhibiteur et modulateur de la protéine phosphatase 2A (PP2A), influençant ainsi les réseaux de signalisation dépendants de la phosphorylation. Par la régulation de PP2A et des activités associées à la chromatine, ANP32A contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et des programmes transcriptionnels liés à la différenciation et à l’adaptation au stress. Elle a également été impliquée dans la régulation de l’apoptose ainsi que, plus largement, dans l’homéostasie de l’ARN et des protéines via des interactions avec des complexes nucléaires. Une activité dérégulée d’ANP32A/I1PP2A et une signalisation PP2A altérée sont pertinentes dans l’étude des voies des kinases oncogéniques, de la neurobiologie et de phénotypes inflammatoires ou liés au stress, où l’équilibre des phosphatases façonne les réponses cellulaires.

ANP32A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Anp32a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANP32A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Anp32a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Anp32a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANP32A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Anp32a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANP32A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANP32A dans les cellules tumorales présentant une expression de Anp32a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.