I-309 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422834

Descripción general

Ccl1 codifica la quimiocina CC I-309, un ligando secretado que señaliza principalmente a través de CCR8 para dirigir la quimiotaxis y el posicionamiento de células inmunitarias dentro de tejidos inflamados. En el ratón, CCL1 es producida por células T activadas, monocitos/macrófagos y otros leucocitos, y contribuye al tráfico leucocitario, a la coordinación de redes de citocinas y a la regulación de microambientes inflamatorios. Este eje se cruza con programas inflamatorios vinculados a NF-κB y modula las respuestas inmunitarias adaptativas al influir en la polarización y el reclutamiento de células T. La alteración de la señalización Ccl1/CCR8 se ha asociado con modelos de inflamación alérgica, patología tipo autoinmune e infiltración inmunitaria asociada a tumores, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de inmunopatología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO I-309 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína I-309.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl1 para la investigación de la señalización de I-309, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccl1 críticos para la función de I-309
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido I-309 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido I-309 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR I-309 (m) y el plásmido HDR I-309 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.