Plasmide Double Nickase (h) HXK III: sc-403846-NIC

HK3 humain code l’hexokinase 3 (HXK III), une enzyme ATP-dépendante qui phosphoryle le glucose en glucose-6-phosphate, engageant ainsi le glucose dans le métabolisme intracellulaire et couplant la disponibilité en nutriments à la production d’énergie. En contrôlant l’entrée dans la glycolyse et en fournissant des substrats à la voie des pentoses phosphates ainsi qu’à la synthèse du glycogène, HXK III contribue à façonner l’équilibre rédox cellulaire et les capacités biosynthétiques. L’expression de HK3 est enrichie dans les lignées hématopoïétiques et myéloïdes, reliant son activité à la programmation métabolique des cellules immunitaires lors de l’activation et de la différenciation. Une activité des hexokinases dérégulée et une utilisation altérée du glucose sont fréquemment associées à la reprogrammation métabolique observée dans le cancer et les états inflammatoires, ce qui fait de HK3 un nœud pertinent pour étudier la bioénergétique liée aux maladies.

HXK III Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HK3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.