HSPA6 Double Nickase Plasmid (h): sc-400870-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSPA6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSPA6 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSPA6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPA6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSPA6: sc-374589
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSPA6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400870-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSPA6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400870-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA6 kodiert ein stressinduzierbares Mitglied der HSP70-Chaperonfamilie, das neu synthetisierte und geschädigte Proteine stabilisiert und nach akutem zellulärem Stress zur Wiederherstellung der Proteostase beiträgt. HSPA6 ist an der ATP-abhängigen Proteinfaltung, der Verhinderung von Proteinaggregation und der Erholung des Proteoms nach Hitzeschock, oxidativem Stress und proteotoxischen Belastungen beteiligt und ist in Signalwege wie die Hitzeschockantwort, den Umgang mit fehlgefalteten Proteinen und die Proteinqualitätskontrolle eingebunden. Indem die Expression von HSPA6 die Faltungskapazität und die Verfügbarkeit von Chaperonen beeinflusst, kann sie die zelluläre Anfälligkeit für stressbedingte Funktionsstörungen modulieren und ist daher relevant für Studien zu Proteostase-Ungleichgewichten, wie sie bei Neurodegeneration, der Stressanpassung von Krebszellen und in inflammatorischen Mikroumgebungen beobachtet werden.
HSPA6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPA6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPA6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPA6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPA6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.