Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSPA2: sc-400832-ACT

HSPA2 code un membre de la famille HSP70 de chaperons moléculaires ATP-dépendants, qui soutient la protéostasie en favorisant le repliement des polypeptides naissants, en empêchant l’agrégation des protéines et en coordonnant le repliement ou la dégradation des protéines endommagées par le stress. L’activité de HSPA2 s’inscrit à l’interface de la régulation de la réponse au choc thermique, du contrôle qualité des protéines médié par les chaperons et de l’adaptation cellulaire au stress protéotoxique, influençant des processus tels que la progression du cycle cellulaire et la différenciation. Dans les tissus humains, HSPA2 est notamment associée au développement des cellules germinales et à la fonction spermatique, et une expression altérée a été rapportée dans divers contextes pertinents pour les maladies où la protéostasie et la signalisation du stress sont perturbées, notamment en biologie tumorale et dans les maladies neurodégénératives. Ces caractéristiques font de HSPA2 un point d’entrée utile pour étudier des programmes transcriptionnels sensibles au stress et la régulation, dépendante des chaperons, des protéines clientes.

HSPA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSPA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSPA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSPA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSPA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSPA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSPA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSPA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSPA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSPA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.