Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSPA1L: sc-400479-ACT

HSPA1L code un membre de la famille HSP70 de chaperons moléculaires ATP‑dépendants, qui soutiennent la protéostasie en favorisant le repliement des protéines naissantes, en empêchant leur agrégation et en facilitant le repliement de substrats dénaturés par le stress. HSPA1L participe à la réponse cellulaire au choc thermique et interagit avec des réseaux de co‑chaperons pour réguler le contrôle qualité des protéines, notamment la stabilisation de protéines de signalisation et la modulation de programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. Par ces fonctions, HSPA1L peut influencer des voies liées au stress du réticulum endoplasmique, au renouvellement médié par le protéasome et aux décisions de survie cellulaire lors d’un stress protéotoxique. Une activité chaperonne et une signalisation de choc thermique altérées sont associées à des phénotypes pertinents pour la maladie en biologie du cancer, dans la neurodégénérescence et dans des contextes de stress inflammatoire, faisant de HSPA1L une cible utile pour des études mécanistiques de la résistance au stress et du maintien du protéome.

HSPA1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSPA1L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSPA1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSPA1L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSPA1L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSPA1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSPA1L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSPA1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSPA1L dans les cellules tumorales présentant une expression de HSPA1L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.