Plasmide Double Nickase (h) HSP 75: sc-402640-NIC

TRAP1 (HSP 75) est une chaperonne mitochondriale de la famille HSP90 qui soutient le contrôle qualité des protéines, leur repliement et la stabilisation des protéines clientes au sein de la matrice mitochondriale. Elle module la respiration mitochondriale et l’homéostasie bioénergétique, intervient dans la gestion des espèces réactives de l’oxygène et peut influencer la transition de perméabilité ainsi que la signalisation adaptative au stress. Par ces activités, TRAP1 affecte des voies reliant la dynamique mitochondriale aux programmes de survie cellulaire, notamment les réseaux de protéostasie et la reprogrammation métabolique. Une expression ou une activité dérégulée de TRAP1 a été associée à une fonction mitochondriale altérée dans la biologie des cancers, dans des contextes de maladies neurodégénératives et dans d’autres troubles caractérisés par un stress oxydant et un déséquilibre métabolique.

HSP 75 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRAP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.