HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424928

Übersicht

Hs3st3b1 kodiert die Heparansulfat-Glucosamin-3-O-Sulfotransferase 3B1 (HS3ST3B1), ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das 3-O-Sulfatgruppen auf Heparansulfat-Ketten überträgt. Diese Modifikation feinjustiert die Bindung von Heparansulfat-Proteoglykanen an Wachstumsfaktoren, Chemokine und Bestandteile der extrazellulären Matrix und prägt dadurch Signal- und Adhäsionsprozesse, etwa die Modulation von FGF- und VEGF-Signalwegen sowie die Zell-Zell-Kommunikation. Veränderte Sulfatierungsmuster von Heparansulfat wurden mit fehlregulierten Morphogengradienten, entzündlicher Signalübertragung und Tumor-Stroma-Interaktionen in Verbindung gebracht, wodurch HS3ST3B1 für Studien zur Regulation des Mikromilieus und zur Rezeptor-Ligand-Spezifität relevant ist. In Mausmodellen ermöglicht die Störung von Hs3st3b1 mechanistische Untersuchungen der Struktur-Funktions-Beziehungen von Glykosaminoglykanen in Entwicklung und Gewebehomöostase.

Das HS3ST3B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hs3st3b1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hs3st3b1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hs3st3b1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HS3ST3B1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hs3st3b1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HS3ST3B1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hs3st3b1-Exone abzielen, die für die HS3ST3B1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hs3st3b1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HS3ST3B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HS3ST3B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hs3st3b1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HS3ST3B1 HDR-Plasmid (m) und HS3ST3B1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hs3st3b1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hs3st3b1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.