Plasmide CRISPR d'Activation (h) HS2ST1: sc-405010-ACT

HS2ST1 code l’héparane sulfate 2‑O‑sulfotransférase 1, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la 2‑O‑sulfatation des résidus d’acide iduronique au cours de la biosynthèse des protéoglycanes à héparane sulfate. Cette modification contribue à définir la structure fine de l’héparane sulfate et régule la liaison des ligands aux facteurs de croissance, morphogènes et chimiokines, influençant la signalisation via des voies telles que FGF, VEGF, WNT et Hedgehog. En modulant les interactions avec la matrice extracellulaire et l’engagement des récepteurs, HS2ST1 participe à la prolifération et à la migration cellulaires ainsi qu’à la mise en place des patrons de développement. Des altérations des profils de sulfatation de l’héparane sulfate ont été associées à des changements de la signalisation dans le microenvironnement tumoral, à l’angiogenèse et aux réponses inflammatoires, faisant de HS2ST1 une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies de signalisation dépendantes des glycosaminoglycanes.

HS2ST1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HS2ST1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HS2ST1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HS2ST1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HS2ST1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HS2ST1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HS2ST1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HS2ST1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HS2ST1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HS2ST1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.