Particules Lentivirales d'Activation (m) HoxC10: sc-431637-LAC

Hoxc10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxC10, un régulateur se liant à l’ADN qui organise la mise en place des tissus embryonnaires postérieurs et contribue à spécifier l’identité régionale le long de l’axe antéro-postérieur. Chez la souris, HoxC10 participe aux choix de lignée et aux programmes morphogénétiques en intégrant des signaux du développement et en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la différenciation, la migration et l’organisation tissulaire. Son activité est associée à des circuits de régulation génique du développement comprenant d’autres facteurs HOX et des cofacteurs qui gouvernent l’état de la chromatine et la sélection des enhancers. Une expression dérégulée des gènes HOX, y compris des programmes HOXC10 altérés, est fréquemment utilisée comme lecture moléculaire dans des études portant sur la différenciation aberrante et la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique.

Les particules d'activation lentivirales HoxC10 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Hoxc10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HoxC10 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Hoxc10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HoxC10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Hoxc10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.