HoxA5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402499-ACT

HOXA5は、配列特異的にDNAに結合するホメオボックス型転写因子HoxA5をコードしており、ヒトの発生過程における前後軸（anterior–posterior）のパターニングと体節の同一性の確立に寄与します。分化した組織では、HoxA5は他のHOX共因子と協調して転写ネットワークを統合し、細胞運命の決定、上皮分化、組織形態形成を制御するプログラムに関与します。HOXA5発現の異常は、複数の疾患状況において増殖・浸潤・系譜状態の変化と関連しており、発生の再プログラミングや転写制御を研究するうえで有用なノードとなっています。遺伝子発現の調節因子として、HoxA5は分化、細胞外マトリックスのリモデリング、状況依存的な増殖制御に関連する経路で検討されることが多いです。

HoxA5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HOXA5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HoxA5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HOXA5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHOXA5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HoxA5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHOXA5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHoxA5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHOXA5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHoxA5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。