HoxA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403732-ACT

HOXA2 codifica o fator de transcrição homeobox humano HoxA2, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que determina a identidade ântero-posterior durante a embriogênese e coordena a especificação de linhagens em tecidos derivados da crista neural e associados ao rombencéfalo. HoxA2 influencia programas transcricionais do desenvolvimento ao modular o estado da cromatina e ao integrar-se a redes regulatórias responsivas ao ácido retinoico e aos clusters de HOX, que controlam decisões de destino celular e a morfogênese dos tecidos. A expressão desregulada de HOXA2 tem sido associada a anomalias craniofaciais congênitas e a alterações do neurodesenvolvimento, e a atividade alterada de programas HOX também é estudada no contexto de reprogramação transcricional oncogênica. Como regulador do desenvolvimento com efeitos dependentes do contexto, HOXA2 serve como um nó útil para dissecar trajetórias de diferenciação e a arquitetura de circuitos transcricionais.

HoxA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxA2 em células tumorais com expressão de HOXA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.