Plásmido CRISPR de Activación (h) HoxA2: sc-403732-ACT

HOXA2 codifica el factor de transcripción homeobox humano HoxA2, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que establece la identidad anteroposterior durante la embriogénesis y coordina la especificación de linajes en tejidos derivados de la cresta neural y asociados al rombencéfalo. HoxA2 influye en los programas transcripcionales del desarrollo modulando el estado de la cromatina e integrándose con redes reguladoras sensibles al ácido retinoico y con las del clúster HOX que controlan decisiones de destino celular y la morfogénesis tisular. La expresión desregulada de HOXA2 se ha asociado con anomalías congénitas craneofaciales y del neurodesarrollo, y la alteración de la actividad de los programas HOX también se estudia en el contexto de la reprogramación transcripcional oncogénica. Como regulador del desarrollo con efectos dependientes del contexto, HOXA2 sirve como un nodo útil para analizar trayectorias de diferenciación y la arquitectura de circuitos transcripcionales.

HoxA2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOXA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxA2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOXA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOXA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxA2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOXA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxA2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxA2 en células tumorales con expresión de HOXA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.