Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxA1: sc-403158-ACT

HOXA1 code le facteur de transcription homeobox humain HoxA1, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui organise l’axe antéro-postérieur précoce et guide le développement du rhombencéphale et de la région craniofaciale. En contrôlant des programmes de spécification de lignée, HOXA1 influence des réseaux transcriptionnels qui recoupent la signalisation dépendante de l’acide rétinoïque et, plus largement, des processus de différenciation régulés par la chromatine. Une expression dérégulée de HOXA1 a été associée à des états d’expression génique du développement altérés et a été étudiée dans des contextes de malformations congénitales et de reprogrammation transcriptionnelle oncogénique. En tant que régulateur du développement, HOXA1 est largement utilisé comme marqueur et nœud mécanistique pour l’étude des transitions de destinée cellulaire et de la mise en place de patrons guidée par des morphogènes.

HoxA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.