Plásmido Doble Nickase (m) hnRNP U: sc-424561-NIC

Mouse Hnrnpu codifica hnRNP U, una proteína nuclear de unión a ARN y ADN expresada de manera ubicua, que sirve como andamiaje para complejos ribonucleoproteicos y contribuye a la organización de la cromatina. hnRNP U participa en el procesamiento del pre-ARNm, el empalme (splicing) alternativo y la regulación de la expresión génica al conectar transcritos nacientes con la arquitectura nuclear y la maquinaria de transcripción. Se ha implicado en vías que gobiernan la estabilidad del genoma, el metabolismo del ARN y programas transcripcionales asociados al ciclo celular mediante interacciones con ARN largos no codificantes y factores asociados a la cromatina. La desregulación del procesamiento de ARN y de la organización nuclear relacionada con HNRNPU se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y una excitabilidad neuronal alterada, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos en biología del sistema nervioso y regulación génica.

hnRNP U El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hnrnpu en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hnrnpu. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hnrnpu. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hnrnpu alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.