hnRNP E2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402274-ACT

PCBP2 kodiert das heterogene nukleäre Ribonukleoprotein E2 (hnRNP E2), ein RNA-bindendes Protein, das C‑reiche Elemente erkennt und dadurch die posttranskriptionelle Genregulation koordiniert. hnRNP E2 beeinflusst mRNA‑Spleißen, -Stabilität, Polyadenylierung und Translation und formt damit als Reaktion auf zelluläre Signale und Stress die Proteinproduktion. Es trägt zur Assemblierung von Ribonukleoproteinkomplexen bei und interagiert mit Netzwerken, die den RNA‑Metabolismus und die Initiation der Translation steuern. Eine fehlregulierte PCBP2/hnRNP‑E2‑Aktivität wurde mit veränderten Genexpressionsprogrammen in der Krebsbiologie, der Nutzung viraler RNA sowie in Kontexten inflammatorischer Signalübertragung in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung im Hinblick auf Mechanismen der Genregulation und der Kontrolle von Zellzuständen unterstützt.

hnRNP E2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PCBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

hnRNP E2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PCBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PCBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen hnRNP E2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PCBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von hnRNP E2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des hnRNP E2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PCBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.